Raport zbiorczy z badania
Projekt: Eksperymentalna ocena liposomalnej witaminy C wytwarzanej metodą domową.

Zamawiający: LivOn Labs
Czas trwania projektu: 17-19.05.2011
Data sporządzenia raportu: 19.05.2011

Podsumowanie projektu

LivON zwrócił się [do naszego laboratorium] z prośbą o ocenę metod opisanych na rozmaitych stronach internetowych dotyczących domowych sposobów wytwarzania liposomalnej witaminy C.
Pomimo, że na różnych stronach internetowych metody te są do siebie zbliżone, to jednak odmienne są sposoby nasączania lecytyny w wodzie przed zmieszaniem/sonifikacją (poddaniu działaniu ultradźwięków) z roztworem witaminy C. Przetestowaliśmy dwie metody, które różniły się najbardziej:

1. W metodzie A, lecytyna była mieszana z wodą i natychmiast mieszana z roztworem witaminy C, a następnie poddana działaniu ultradźwięków.
2. W metodzie B lecytyna była zanurzana dokładnie w wodzie tak, aby nie było widocznych granulek i dopiero potem była mieszana z roztworem witaminy C i poddawana działaniu ultradźwięków.
3. W celu dokładnego odtworzenia tych metod, zgodnie z opisem, zakupiliśmy lecytynę pochodzącą z produktów nie zawierających żywności modyfikowanej genetycznie (firmy NOW – Nutrition for Optimal Wellness) oraz sonicator firmy Harbor Freight, zgodnie z zaleceniami Sardi i Bradley.
4. Końcowe preparaty liposomalnej witaminy C testowano następnie na obecność enkapsulowanej witaminy C przy pomocy naszej standardowej metodyki służącej do oznaczania enkapsulacji leków.
5. Wyniki wyraźnie wskazują, że żadną z tych metod absolutnie nie uzyskuje się enkapsulacji witaminy C w liposomach.

Metoda A: Domowo wytwarzana liposomalna witamina C metodą Brooksa Bradleya
https://alobar.livejournal.com/3346670.html

Nasz protokół wytwarzania liposomalnej witaminy „C” jest następujący: Przy pomocy małej (500 ml) myjki ultradźwiękowej (produkt nr #03305, zakupiony w Harbor Freight) wykonano następujące czynności:

Rozpuszczono 3 płaskie łyżki stołowe lecytyny sojowej w 1 szklance wody (preferowana woda destylowana).
Rozpuszczono 1 płaską łyżkę stołową sproszkowanego kwasu askorbinowego (witaminy „C”) w 1/2 szklanki wody.
Przelano oba roztwory razem do naczynia myjki ultradźwiękowej i włączono urządzenie. Pozostawiając górną część myjki otwartą, przy użyciu plastikowej słomki delikatnie i powoli mieszano zawartość. Sonifikowano w 3 seriach (6 minut). Po tym czasie cały roztwór powinien zostać zmieszany w mętną, homogenną, przypominającą mleko mieszaninę. Powstał roztwór LET.
Receptura ta pozwala na wytworzenie około 12 gramów (12 000 mg) witaminy C.
Przy 70% skuteczności enkapsulacji 8400 mg będzie typu LET.

Metoda B: Domowo wytwarzana liposomalna witamina C metodą Billa Sardiego
http://www.pdazzler.com/archives/62

Przy pomocy małej (500 ml) myjki ultradźwiękowej (produkt nr #03305, zakupiony w Harbor Freight) wykonano następujące czynności:

Do 1 szklanki wody destylowanej należy dodać 3 płaskie łyżki stołowe granulowanej lecytyny sojowej i mieszać energicznie przez 5 minut
Odłożyć mieszaninę lecytyny do lodówki na co najmniej 2 godziny
Po dwugodzinnym okresie namaczania energicznie wstrząsać mieszaninę przez kolejne 3 – 5 minut. Na zakończenie granulki lecytyny nie powinny być widoczne.
Rozpuścić 1 płaską łyżkę stołową witaminy C (kwasu askorbinowego) w 60 ml wody destylowanej.
Rozpuścić 1 czubatą łyżkę stołową sody oczyszczonej firmy Bob’s Red Mill w 60 ml wody destylowanej, używając do tego odrębnego słoika z zakręcanym wieczkiem o pojemności co najmniej 180 ml. Wstrząsać lub mieszać roztwór przez 3 minuty, aż do rozpuszczenia się sody.
Mieszając roztwór witaminy C w wodzie destylowanej, powoli, kroplami, przelać do niego roztwór sody oczyszczonej w wodzie destylowanej.
Po zakończeniu mieszania roztworu sody oczyszczonej z roztworem witaminy C bulgotanie ustanie. Jeśli w słoiku osadziła się jakakolwiek pozostałość sody oczyszczonej, uzyskaną mieszaninę zmieszać razem w tym słoiku, wymieszać i przelać powstałą mieszaninę witaminy C i wodorowęglanu sodu do myjki ultradźwiękowej.
Wlać roztwór lecytyny do naczynia myjki ultradźwiękowej z mieszaniną witaminy C i sody oczyszczonej i wymieszać razem zawartość.
Włączyć myjkę ultradźwiękową i używając plastikowej słomki (z pozostawieniem górnej części myjki otwartej) delikatnie mieszać zawartość. Powtórzyć łącznie 6 serii (12 – 18 minut). Po tym czasie cały roztwór powinien zostać zmiksowany w mętną, jednorodną, przypominającą mleko mieszaninę.
Wedle uznania, można zwiększyć stopień enkapsulacji poprzez kilkukrotne powtórzenie cykli ultradźwiękowych.
Protokół pozwala na uzyskanie 12 gramów (12 000 mg) askorbinianu, witaminy C.
Przy 70%-90% skuteczności enkapsulacji 8400mg powinno być w postaci LET.

Uwaga (od badacza z laboratorium): Główna różnica pomiędzy tymi dwoma metodami polega na tym, że metoda Sardiego nakazuje namaczanie lecytyny przez dłuższy okres czasu, podczas gdy metoda Bradleya nie określa czas inkubacji lecytyny. Osoby, które stosują metodę Bradleya, mogą równie dobrze wymieszać roztwór lecytyny z roztworem witaminy C wkrótce po wykonaniu obu roztworów. Z naukowego punktu widzenia może to powodować dużą różnicę. W metodzie A, liposomy formują się w obecności witaminy C, a w metodzie B liposomy są już dobrze uformowane przed dodaniem roztworu witaminy C.

Materiał i Wyposażenie

Lecytyna: Lecytyna granulowana, nie pochodząca z żywności modyfikowanej genetycznie, 454g produkcji Now Foods
Witamina C: kwas askorbinowy (produkcji Bio-Alternative)
Sonicator: Myjka ultradźwiękowa produkcji Harbor Freight, produkt nr #03305

Metoda A:

Dwadzieścia (20) gramów lecytyny dodano do butelki wody destylowanej o objętości 500 ml. Zawiesinę lecytyny trzymano w temperaturze pokojowej przez 3 godziny, intensywnie wytrząsając do czasu, aż granulki przestały być widoczne. W innej butelce 12,8 g kwasu askorbinowego całkowicie rozpuszczono w 125 ml wody. Oba roztwory następnie przelano do myjki ultradźwiękowej i sonifikowano przez 8-10 min. Po zakończeniu procesu liposomy są żółtawego koloru, w wyglądzie jednorodne i bez widocznych oznak rozdzielania się.

Metoda B:

12,8 g kwasu askorbinowego zostało rozpuszczone w 125 ml wody i przelane do myjki ultradźwiękowej. Osobno 20 g lecytyny zostało rozproszone w 250 ml wody. Przed wlaniem do myjki ultradźwiękowej lecytyna nie miała zbyt dużo czasu aby ulec rozproszeniu / rozpuszczeniu w wodzie. Połączone roztwory następnie zostały poddane sonifikacji ultradźwiękowej przez 10 minut i nieprzerwanie mieszane plastikową słomką. Moc myjki nie wydaje się wystarczająco duża, aby całkowicie rozproszyć lipidy i widoczna była znaczna ilość nierozproszonych granulek lecytyny pływających na powierzchni wody. Z tego powodu roztwór przeniesiono z powrotem do 500-mililitrowej butelki i energicznie wstrząsano aż do uzyskania homogennego roztworu. Na końcu procesu, liposomy były mętno-żółtawe, gładkie bez widocznego rozdzielania się. Fizykalnie ta partia liposomów nie różniła się od poprzedniej partii przygotowanej przy pomocy metody A.

Uwaga: W tej procedurze nie użyliśmy wodorowęglanu w celu zobojętnienia kwasu askorbinowego (kroki 5-7), który służy tylko do zneutralizowania kwaśnego smaku kwasu askorbinowego i nie powinien mieć wpływu na enkapsulację liposomalną witaminy C.

Analiza enkapsulacji liposomalnej

Wydajność enkapsulacji witaminy C w liposomach mierzono za pomocą uznanej metody analitycznej HPLC często używanej do określania skuteczności enkapsulacji w liposomach leku w preparatach farmaceutycznych. Ściśle ujmując, próbkę (2-3 ml) otrzymanej w powyższy sposób liposomalnej witaminy C przenoszono na filtr odśrodkowy (MWCO 10K) i wirowano przy prędkości 5000 obrotów na minutę w temperaturze 15° C przez 2-3 godziny. Klarowny przesącz zbierający się w dolnej części probówki zawiera wolną (nieenkapsulowaną) witaminę C.
Stężenie wolnej witaminy C i całkowite stężenie witaminy C w liposomach oznaczano metodą HPLC opracowaną w naszym laboratorium. Przedstawione wyniki stanowią średnią z dwóch prób HPLC otrzymanych z pojedynczych partii liposomów uzyskiwanych według każdej metody.

Skuteczność enkapsulacji została obliczona następująco:

Enkapsulacja(%) = (1 – stężenie wolnej witaminy C / całkowite stężenie witaminy C) x 100

Wyniki i Wniosek